Stevia rebaudiana ve Momordica charantia'dan invertaz enziminin TPP yöntemi ile saflaştırılması

Abstract

Bu çalışmada daha önce TPP yöntemi ile herhangi bir enzimin saflaştırılmasında kullanılmayan fitoterapik bir bitki olan Momordica charantia'dan özelikle gıda sanayinde oldukça yaygın kullanım alanı olan invertaz enziminin TPP yöntemi ile tek basamakta saflaştırılması için yöntem geliştirilmesi ve saf enzimin karakterizasyonunun yapılması amaçlanmıştır. TPP yöntemi ile invertazın bu kaynaktan saflaştırılması için gerekli optimum şartlar belirlenmiş, sonuç olarak, %70 amonyum sülfat doygunluğu, 1:0,5 t-bütanol oranı, ve 30 dakikalık inkübasyon süresi kullanılarak %20,28 verimle 10,48 kat kısmi saflaştırılmıştır. TPP sonrası toplam protein kaba homojenatta 34,86 mg'dan 0,675 mg'a azalmış, kaba homojenatta 21,672 U/mg protein olan spesifik aktivite değeri, TPP sonrasında 227,022 U/mg protein olarak artmıştır. Sonuç olarak optimize edilen TPP yöntemiyle, literatürde bulunan birçok saflaştırma basamağına göre iyi bir saflaştırma gerçekleştirilmiştir.This study was aimed to purify a widespread used enzyme particularly in the food industry intervase from an unused phytotherapy plant Momordica charantia via developing a single step TPP method and to identify the characterization of the pure enzyme. Optimum conditions for TPP method was determined for the purification of Invertase, as a result, 70% ammonium sulfate saturation, 1: 0.5 t-butanol ratio, and a 30 minute incubation time lead to 20.28% efficiency and 10.48 fold partially purification. After TPP, total protein was decreased from 34.86 mg to 0.675 mg in the homogenate, and the specific activity value was increased from 21.672 U/ mg protein to 227.022 U/ mg protein. In conclusion, the optimized single step TPP method revealed a better purification comparing to several purification methods in the literature.